Calculateur de concentration en protéines
Deux façons d’estimer la concentration en protéines. (1) Beer–Lambert : saisissez le coefficient d’extinction molaire et la masse molaire de votre protéine pour convertir l’A280 en mg/mL. (2) A280 × 1 = mg/mL à l’aide de l’hypothèse standard 1 A280 = 1 mg/mL, valable pour des échantillons de protéines mélangées. Le calculateur indique aussi une note de pureté A260/A280.
Calculateur
Saisissez une lecture et calculez pour voir la concentration
Concentration
c = A280 × dilution ÷ E(1 mg/mL) · c(M) = A280 × dilution ÷ ε
Quantification de Beer–Lambert : l'absorbance à 280 nm est proportionnelle à la concentration via le coefficient d'extinction de la protéine. En mode molaire, le résultat est aussi converti en mg/mL à l'aide de la masse moléculaire.
À propos de ce calcul
De quoi il s'agit
Proteins absorb at 280 nm because of aromatic residues (tryptophan, tyrosine, and to a lesser extent cystine). For a purified protein with a known molar extinction coefficient, Beer–Lambert gives an accurate concentration; for a mixed or unknown sample, the heuristic 1 A280 = 1 mg/mL is a usable estimate.
Pourquoi on l'utilise
Almost every downstream application — gel loading, dilution to a working stock, assay setup — needs a protein concentration. A280 is the fastest available measurement, but the assumption you make (1 mg/mL per A280 vs. Beer–Lambert) drives the accuracy of every result downstream.
L'intérêt de ce calculateur
A280 readings are often reported in instrument software, but converting them into a usable mg/mL number is where mistakes happen — particularly the missing division by path length or the wrong extinction coefficient. The calculator does the unit bookkeeping and shows both the 1-A280 and Beer–Lambert results side by side.
Hypothèses clés
- The spectrophotometer was blanked with the same buffer the sample was diluted into.
- For the 1-A280 path, the protein mixture is roughly "average" (e.g. a crude lysate); for purified proteins use the calculated path.
- Path length is 1 cm, or the instrument has been corrected for a different path length.
Limites
- The 1 A280 = 1 mg/mL assumption fails badly for samples rich in nucleic acids (use A260/A280 subtraction).
- It cannot detect proteins that lack aromatic residues or are present at sub-A280 noise-floor concentrations.
- It does not distinguish folded from denatured protein — the extinction coefficient assumes the folded environment.
Ce que cet outil calcule
- Concentration mg/mL
- Protein concentration in the original (undiluted) sample.
- Concentration molaire µM
- Molar concentration — shown in ε + molecular-weight mode.
Questions fréquentes
Comment calculer la concentration en protéines à partir d'une lecture d'A280 ?
Le calculateur applique la loi de Beer–Lambert à un A280 corrigé du blanc : divisez l'absorbance par votre coefficient d'extinction et multipliez par le facteur de dilution. Fournissez soit le coefficient massique E(1 mg/mL) pour obtenir directement des mg/mL, soit le coefficient molaire ε avec la masse molaire pour obtenir à la fois mg/mL et µM. Entrez 1 comme facteur de dilution pour une lecture non diluée.
Dois-je utiliser E(1 mg/mL) ou le coefficient d'extinction molaire ?
Utilisez le coefficient dont vous disposez réellement. E(1 mg/mL) est l'absorbance d'une solution à 1 mg/mL pour un trajet optique de 1 cm, il donne donc à lui seul la concentration en mg/mL — la BSA, par exemple, vaut environ 1,4. Le coefficient molaire ε en M⁻¹·cm⁻¹ exige aussi la masse molaire en g/mol, et c'est l'option qui rapporte également la concentration en µM.
Que mesure réellement la valeur d'A280 dans un échantillon de protéines ?
Les protéines absorbent l'UV à 280 nm principalement via leurs résidus tryptophane, tyrosine et cystine, si bien que l'absorbance est proportionnelle à la quantité de protéines dans le trajet optique. Cette relation n'est fixe qu'une fois fourni le coefficient propre à votre protéine, ce qui explique pourquoi le calculateur demande E(1 mg/mL) ou ε. L'avantage est que la méthode ne demande que quelques microlitres et laisse l'échantillon utilisable en aval.
Pourquoi le résultat affiche-t-il à la fois mg/mL et µM, et lequel utiliser ?
Les deux apparaissent lorsque vous travaillez en mode molaire, car la masse molaire permet au calculateur de convertir entre masse et quantité. mg/mL est l'unité pratique pour diluer une solution mère à une concentration de travail ou charger un gel, tandis que µM compte quand la stœchiométrie molaire pilote l'expérience, comme les essais de liaison ou enzymatiques. En mode E(1 mg/mL), seul mg/mL est rapporté, faute de masse molaire saisie.
Qu'est-ce qui faussera ma concentration en protéines par A280 ?
La contamination par des acides nucléiques gonfle l'A280 et fausse la concentration calculée vers le haut, alors vérifiez le ratio 260/280 de l'échantillon et corrigez si besoin. Des composants du tampon qui absorbent près de 280 nm, comme le DTT à haute concentration, l'imidazole ou le Triton, biaisent aussi la lecture : faites donc le blanc avec le même tampon. Le calculateur suppose un trajet optique de 1 cm et un coefficient adapté à votre protéine et à son état réduit, et n'applique aucune correction de contamination propre.
À usage uniquement scientifique et pédagogique. Ne convient pas aux décisions cliniques ou diagnostiques. Vérifiez toujours vos calculs de manière indépendante avant toute utilisation critique.