Proteinkonzentrations-Rechner
Zwei Wege zur Schätzung der Proteinkonzentration. (1) Beer–Lambert: Geben Sie den molaren Extinktionskoeffizienten und die Molekülmasse Ihres Proteins ein, um A280 in mg/mL umzurechnen. (2) A280 × 1 = mg/mL mit der Standardannahme 1 A280 = 1 mg/mL, die für gemischte Proteinproben funktioniert. Der Rechner gibt auch eine A260/A280-Reinheitsnotiz aus.
Rechner
Messwert eingeben und berechnen, um die Konzentration zu sehen
Konzentration
c = A280 × dilution ÷ E(1 mg/mL) · c(M) = A280 × dilution ÷ ε
Beer–Lambert-Quantifizierung: Die Extinktion bei 280 nm ist über den Extinktionskoeffizienten des Proteins proportional zur Konzentration. Im molaren Modus wird das Ergebnis mit der Molmasse zusätzlich in mg/mL umgerechnet.
Zu dieser Berechnung
Worum es geht
Proteins absorb at 280 nm because of aromatic residues (tryptophan, tyrosine, and to a lesser extent cystine). For a purified protein with a known molar extinction coefficient, Beer–Lambert gives an accurate concentration; for a mixed or unknown sample, the heuristic 1 A280 = 1 mg/mL is a usable estimate.
Warum man es verwendet
Almost every downstream application — gel loading, dilution to a working stock, assay setup — needs a protein concentration. A280 is the fastest available measurement, but the assumption you make (1 mg/mL per A280 vs. Beer–Lambert) drives the accuracy of every result downstream.
Warum es diesen Rechner gibt
A280 readings are often reported in instrument software, but converting them into a usable mg/mL number is where mistakes happen — particularly the missing division by path length or the wrong extinction coefficient. The calculator does the unit bookkeeping and shows both the 1-A280 and Beer–Lambert results side by side.
Wichtige Annahmen
- The spectrophotometer was blanked with the same buffer the sample was diluted into.
- For the 1-A280 path, the protein mixture is roughly "average" (e.g. a crude lysate); for purified proteins use the calculated path.
- Path length is 1 cm, or the instrument has been corrected for a different path length.
Einschränkungen
- The 1 A280 = 1 mg/mL assumption fails badly for samples rich in nucleic acids (use A260/A280 subtraction).
- It cannot detect proteins that lack aromatic residues or are present at sub-A280 noise-floor concentrations.
- It does not distinguish folded from denatured protein — the extinction coefficient assumes the folded environment.
Was berechnet wird
- Konzentration mg/mL
- Protein concentration in the original (undiluted) sample.
- Molare Konzentration µM
- Molar concentration — shown in ε + molecular-weight mode.
Häufig gestellte Fragen
Wie berechne ich die Proteinkonzentration aus einer A280-Messung?
Der Rechner wendet das Beer–Lambert-Gesetz auf eine geblankte A280 an: Teilen Sie die Extinktion durch Ihren Extinktionskoeffizienten und multiplizieren Sie mit dem Verdünnungsfaktor. Geben Sie entweder den Massenkoeffizienten E(1 mg/mL) an, um direkt mg/mL zu erhalten, oder den molaren Koeffizienten ε zusammen mit dem Molekulargewicht, um sowohl mg/mL als auch µM zu erhalten. Tragen Sie 1 als Verdünnungsfaktor für eine unverdünnte Messung ein.
Sollte ich E(1 mg/mL) oder den molaren Extinktionskoeffizienten verwenden?
Verwenden Sie den Koeffizienten, den Sie tatsächlich haben. E(1 mg/mL) ist die Extinktion einer 1 mg/mL-Lösung bei 1 cm Schichtdicke und liefert daher allein die Konzentration in mg/mL — BSA liegt beispielsweise bei etwa 1,4. Der molare Koeffizient ε in M⁻¹·cm⁻¹ benötigt zusätzlich das Molekulargewicht in g/mol, und nur diese Option meldet die Konzentration auch in µM.
Was misst der A280-Wert in einer Proteinprobe tatsächlich?
Proteine absorbieren UV-Licht bei 280 nm hauptsächlich über ihre Tryptophan-, Tyrosin- und Cystin-Reste, daher skaliert die Extinktion mit der Proteinmenge im Strahlengang. Diese Beziehung ist erst fix, wenn Sie den zu Ihrem Protein passenden Koeffizienten angeben, weshalb der Rechner nach E(1 mg/mL) oder ε fragt. Der Vorteil: die Methode braucht nur wenige Mikroliter und die Probe bleibt für die weitere Arbeit verwendbar.
Warum zeigt das Ergebnis sowohl mg/mL als auch µM, und wann nutze ich was?
Beide erscheinen, wenn Sie im molaren Modus rechnen, weil das Molekulargewicht dem Rechner die Umrechnung zwischen Masse und Stoffmenge erlaubt. mg/mL ist die praxisnahe Einheit, um einen Ansatz auf eine Arbeitskonzentration zu verdünnen oder ein Gel zu laden, während µM zählt, wenn die molare Stöchiometrie das Experiment bestimmt, etwa bei Bindungs- oder Enzymassays. Im E(1 mg/mL)-Modus wird nur mg/mL gemeldet, da kein Molekulargewicht eingegeben wurde.
Was macht meine Protein-Konzentration über A280 falsch?
Nukleinsäure-Kontamination erhöht die A280 und treibt die berechnete Konzentration nach oben, prüfen Sie also das A260/A280-Verhältnis der Probe und korrigieren Sie bei Bedarf. Pufferbestandteile, die nahe 280 nm absorbieren — etwa DTT in hoher Konzentration, Imidazol oder Triton — verfälschen die Messung ebenfalls, also blanken Sie gegen denselben Puffer. Der Rechner nimmt eine Schichtdicke von 1 cm und einen Koeffizienten an, der zu Ihrem Protein und dessen Reduktionszustand passt, und führt keine eigene Kontaminationskorrektur durch.
Nur für Forschung und Lehre. Nicht für klinische oder diagnostische Entscheidungen. Prüfen Sie Berechnungen vor kritischen Anwendungen immer eigenständig nach.