Calculadora de Master Mix de PCR
Informe os volumes por reação de cada componente do master mix, o número de reações e a fração de excedente para cobrir perdas de pipetagem. A calculadora retorna o volume total a preparar de cada componente — e o volume final do master mix — com avisos práticos quando a quantidade de molde ou iniciador ultrapassa limites comuns de bancada.
Calculadora
Digite seu preparo e calcule para ver o master mix
Master mix total (exceto template)
Nota de bancada
Per-component volumes
| Componente | µL / rxn | µL totais |
|---|
Inventory check (read-only)
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Vcomponent = Cfinal × Vrxn ÷ Cstock · Vpolymerase = U ÷ (U/µL) · Vwater = (Vrxn − Vtemplate) − ΣV
O volume de cada aditivo vem da equação de diluição C₁V₁ = C₂V₂. A polimerase é especificada como quantidade por reação (U), então seu volume é simplesmente as unidades desejadas divididas pela concentração estoque. A água completa o volume de reação após template e aditivos. Cada volume é então escalado por (reações × fator de excesso) para o master mix.
Sobre este cálculo
O que é
Um master mix de PCR é uma preparação única que contém todos os reagentes comuns a todas as reações (tampão, dNTPs, polimerase, água), aliquotado antes da adição dos iniciadores específicos do molde. Preparar um master mix melhora a reprodutibilidade e economiza tempo de pipetagem.
Por que é usado
Realizar 24, 48 ou 96 reações um reagente de cada vez é lento e sujeito a erros. Um master mix torna cada tubo de reação idêntico, exceto pelo molde, e o excedente para volume morto (tipicamente 5–10 %) evita que o último tubo fique aquém.
Por que esta calculadora existe
Os volumes por reação são minúsculos (µL) e pequenos erros se acumulam ao longo da placa. A calculadora multiplica cada componente por N e por um fator de excedente, e exibe avisos comuns de bancada (porcentagem de molde, concentração de iniciador) fáceis de deixar passar em um preparo atribulado.
Premissas principais
- Cada reação usa o mesmo master mix (mesma polimerase, mesmo par de iniciadores, mesmo volume final).
- A fração de excedente é adequada ao número de reações (10 % fixo funciona para ≤50 reações).
- Os estoques dos componentes estão nas concentrações esperadas pela calculadora — verifique antes de escalar.
Limitações
- Não verifica correspondência de Tm dos iniciadores nem formação de dímeros — projete separadamente.
- Não modela a otimização de temperatura de um termociclador de gradiente.
- Não compensa reagentes viscosos (por ex. estoques com alta concentração de glicerol), em que a precisão de pipetagem cai.
O que é calculado
- Component volumes
- Volume of each additive per reaction and for the whole master mix.
- Nuclease-free water (total)
- Water volume to bring the master mix to the reaction volume.
- Volume total de master mix
- Combined volume of all additives and water, excluding template.
Perguntas frequentes
O que é um master mix de PCR e por que preparar um?
Um master mix é uma preparação única que contém todos os componentes da reação exceto o DNA molde — tampão, dNTPs, MgCl₂, polimerase, iniciadores e água. Aliquotar uma só mistura, em vez de pipetar cada reagente em cada tubo, mantém a composição da reação idêntica entre as amostras e reduz o erro e o tempo de pipetagem. Esta calculadora escala uma receita por reação para qualquer número de tubos e retorna os µL de cada componente por reação e no total.
Como uso a calculadora de master mix de PCR?
Informe o volume de reação, o número de reações, o fator de excedente e o volume de molde por tubo, e defina a concentração de estoque e a concentração final de cada componente: tampão (×/×), dNTPs (mM/mM), MgCl₂ (mM/mM), polimerase (estoque em U/µL com as U desejadas por reação) e ambos os iniciadores (µM/µM). O resultado mostra o volume de cada aditivo por reação e para todo o master mix, com água livre de nucleases completando o restante. Digite 0 como concentração final de um componente opcional, como MgCl₂ extra ou um iniciador, para omiti-lo da mistura.
O que é o fator de excedente e por que preparar master mix extra?
A pipetagem perde um pouco de cada reagente, então os laboratórios geralmente preparam 5–10 % de mistura extra para que o último tubo não fique aquém. Nesta calculadora o excedente é um multiplicador aplicado a toda a receita: 1,1 prepara 10 % a mais, e os valores aceitos vão de 1 a 10. Cada componente e o balanço de água são escalados por número de reações × excedente, de modo que os totais no resultado são os volumes a pipetar no tubo em comum.
Como a calculadora determina o volume de cada componente?
Cada aditivo baseado em concentração usa a equação de diluição V = concentração final × volume de reação ÷ concentração de estoque, a mesma relação C1V1 usada na bancada. A polimerase é a exceção: você informa uma quantidade em unidades por reação contra um estoque em U/µL, então seu volume é unidades ÷ concentração de estoque. A água é balanceada por subtração — volume de reação menos molde menos todos os aditivos.
Por que o DNA molde não é incluído no master mix?
O molde é o único componente que difere entre tubos, então é adicionado a cada tubo separadamente depois que o master mix é distribuído. Você ainda informa o volume de molde por tubo, porque a calculadora o subtrai ao balancear a água para que mistura mais molde seja igual ao seu volume de reação. Se os aditivos não couberem no espaço restante após o molde, a calculadora reporta um erro e pede para aumentar o volume de reação ou reduzir as concentrações dos componentes.
Apenas para uso em pesquisa e ensino. Não destinado a decisões clínicas ou de diagnóstico. Sempre verifique os cálculos de forma independente antes de usos críticos.