Calculadora de Concentração de Ácidos Nucleicos
Converta uma leitura de A260 do espectrofotômetro em concentração de DNA ou RNA usando os fatores de absorbância padrão (50 µg/mL para DNAds, 40 µg/mL para RNA, 33 µg/mL para DNAss). Informe o fator de diluição usado na leitura e, opcionalmente, um A280 para calcular a pureza A260/A280.
Calculadora
Digite uma leitura e calcule para ver a concentração
Concentração
Nota de bancada
c (µg/mL) = A260 × dilution factor × factor
Uma unidade de absorbância de 1,0 a 260 nm corresponde a 50 µg/mL de DNA dupla fita, 33 µg/mL de DNA fita simples ou 40 µg/mL de RNA. O fator de diluição converte a leitura de volta para a amostra original. Rendimento = concentração × volume ÷ 1000.
Sobre este cálculo
O que é
Os ácidos nucleicos absorvem em 260 nm, e a absorbância de uma solução a 1 mg/mL em caminho óptico de 1 cm é uma constante publicada (50 para DNAds, 40 para RNA, 33 para DNAss). Medir o A260 em uma alíquota diluída e multiplicar pelo fator de diluição e pela constante adequada fornece a concentração do estoque.
Por que é usado
Every downstream application — PCR, sequencing, transfection, in vitro transcription — needs an accurate nucleic acid concentration. A260 is the most accessible bench measurement, but the constant and dilution must be applied correctly.
Por que esta calculadora existe
Mixing up the absorbance factor (50 vs 40 vs 33) or forgetting the dilution factor are the two classic bench errors. The calculator makes the constant explicit, multiplies by your dilution, and reports a purity ratio when you also provide an A280.
Premissas principais
- O espectrofotômetro foi zerado corretamente com o mesmo tampão em que a amostra foi diluída.
- A amostra é pura o suficiente em A260 para a lei de Beer–Lambert se aplicar (A260 < ~1,5).
- O caminho óptico é de 1 cm (ou seu instrumento foi corrigido para um caminho diferente).
Limitações
- A260 cannot distinguish DNA from RNA — use a fluorometric assay for that.
- Contaminants such as phenol or carbohydrates inflate A260, producing overestimated concentrations.
- Very low concentrations (A260 < 0.05) are at the noise floor of standard spectrophotometers.
O que é calculado
- Concentração µg/mL
- Analyte concentration in the original sample: A260 × dilution factor × conversion factor.
- Rendimento total µg
- Total mass of analyte in the final volume (shown when a volume is supplied).
- Razão A260/A280
- Purity indicator (shown when A280 is supplied). Typical pure ranges: dsDNA 1.7–2.0, ssDNA 1.8–2.0, RNA 1.9–2.1.
Perguntas frequentes
Como converto uma leitura de A260 em concentração de DNA ou RNA?
Multiplique o A260 corrigido em branco pelo fator de diluição total e pelo fator de conversão do seu analito: concentração (µg/mL) = A260 × fator de diluição × fator. A calculadora aplica o fator correto automaticamente assim que você escolhe o analito e reporta a concentração da amostra original. Informe também o volume final e ela retorna o rendimento total em µg.
Qual é a diferença entre os fatores de conversão 50, 40 e 33?
São as constantes padrão de absorbância: uma leitura de A260 igual a 1,0 corresponde a 50 µg/mL para DNAds, 40 µg/mL para RNA e 33 µg/mL para DNAss. O fator de que você precisa depende apenas do analito medido, então escolha DNAds, DNAss ou RNA no campo Analito. Aplicar a constante errada é um dos dois erros clássicos de bancada que esta calculadora foi projetada para prevenir.
Qual é uma boa relação 260/280 para ácido nucleico puro?
As faixas típicas de pureza são 1,7–2,0 para DNAds, 1,8–2,0 para DNAss e 1,9–2,1 para RNA. Fornecendo uma leitura opcional de A280, a calculadora reporta a relação 260/280 e sinaliza um resultado fora da faixa do seu analito, já que proteína ou outros contaminantes podem afetar a leitura. Uma relação baixa é um aviso de pureza, não uma amostra quebrada, e a relação não detecta todo contaminante.
Preciso corrigir a diluição que fiz antes de ler a amostra?
Sim. Informe a diluição total aplicada à amostra antes da leitura, e a calculadora a multiplica para que a concentração reportada se refira ao seu tubo original, e não ao alíquota diluída. Ler uma amostra de 2 µL em 100 µL, por exemplo, corresponde a um fator de diluição de 50. Esquecer esse fator é o outro erro clássico de bancada, e subestima a concentração exatamente pela diluição que você aplicou.
O que a quantificação por A260 não pode me dizer sobre a minha amostra?
Ela mede o ácido nucleico que absorve perto de 260 nm, então contaminantes como proteína, fenol ou nucleotídeos livres inflacionam a concentração aparente, e o método não distingue material íntegro de degradado. Também pressupõe uma leitura corrigida em branco feita em caminho óptico de 1 cm, ou óptica microvolume equivalente. Use um gel ou uma análise de fragmentos para a integridade, e trate a relação de pureza como uma ferramenta de triagem grosseira.
Apenas para uso em pesquisa e ensino. Não destinado a decisões clínicas ou de diagnóstico. Sempre verifique os cálculos de forma independente antes de usos críticos.