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核酸濃度計算ツール

分光光度計のA260測定値を、標準的な吸光係数(dsDNA 50 µg/mL、RNA 40 µg/mL、ssDNA 33 µg/mL)を用いてDNAまたはRNA濃度に換算します。測定に用いた希釈倍率を入力し、オプションでA280を入力することでA260/A280純度比も算出します。

DNA・RNA v1.0.0

計算ツール

入力

ブランク補正済みの260 nm吸光度読み値。

換算係数を設定します:1.0 A260あたり50 µg/mL(二本鎖DNA)、33(一本鎖DNA)、40(RNA)。

測定前の総希釈(例:検体2 µLを100 µLに → 50)。

A260/A280純度比にのみ使用します。

総収量(µg)を計算するための検体総容量。

読み値を入力して計算すると濃度が表示されます

この計算について

計算の考え方

核酸は260 nmで吸光し、光路長1 cmにおける1 mg/mL溶液の吸光度は公表された定数です(dsDNA 50、RNA 40、ssDNA 33)。希釈したアリコートのA260を測定し、希釈倍率と適切な定数を掛けることで、ストック濃度が得られます。

なぜ使うのか

Every downstream application — PCR, sequencing, transfection, in vitro transcription — needs an accurate nucleic acid concentration. A260 is the most accessible bench measurement, but the constant and dilution must be applied correctly.

この計算ツールが役立つ理由

Mixing up the absorbance factor (50 vs 40 vs 33) or forgetting the dilution factor are the two classic bench errors. The calculator makes the constant explicit, multiplies by your dilution, and reports a purity ratio when you also provide an A280.

主な前提条件

  • 分光光度計が、サンプルを希釈したのと同じ緩衝液で正しくブランクされていること。
  • サンプルがBeer–Lambert則を適用できる程度にA260で十分純粋であること(A260 < 約1.5)。
  • 光路長が1 cmであること(または機器が異なる光路長で補正されていること)。

制限事項

  • A260 cannot distinguish DNA from RNA — use a fluorometric assay for that.
  • Contaminants such as phenol or carbohydrates inflate A260, producing overestimated concentrations.
  • Very low concentrations (A260 < 0.05) are at the noise floor of standard spectrophotometers.

計算結果の項目

濃度 µg/mL
Analyte concentration in the original sample: A260 × dilution factor × conversion factor.
総収量 µg
Total mass of analyte in the final volume (shown when a volume is supplied).
A260/A280比
Purity indicator (shown when A280 is supplied). Typical pure ranges: dsDNA 1.7–2.0, ssDNA 1.8–2.0, RNA 1.9–2.1.

よくある質問

  • A260の測定値をDNAやRNAの濃度にどう換算しますか。

    ブランク補正済みのA260に、総希釈倍率と測定対象の換算係数を掛けます。濃度(µg/mL)=A260×希釈倍率×係数です。本ツールは対象を選択すると適切な係数を自動的に適用し、オリジナル試料の濃度を返します。最終容量も入力すれば、総収量(µg)も求められます。

  • 換算係数50・40・33の違いは何ですか。

    これらは標準的な吸光定数で、A260が1.0の値はdsDNAなら50 µg/mL、RNAなら40 µg/mL、ssDNAなら33 µg/mLに相当します。必要な係数は測定対象の種類だけで決まるため、Analyte欄でdsDNA・ssDNA・RNAを選択してください。誤った定数を適用するのは、本ツールが防ぐように設計された2つの典型的なベンチミスのひとつです。

  • 純粋な核酸のA260/280（260/280）はどのくらいが目安ですか。

    純度の標準範囲はdsDNAで1.7〜2.0、ssDNAで1.8〜2.0、RNAで1.9〜2.1です。オプションでA280を入力すると、本ツールは260/280を計算し、対象の範囲外の値をフラグとして示します。タンパク質などの夾雑物が測定値に影響し得るためです。低い値は純度の警告であって試料が壊れたわけではなく、この比率では検出できない夾雑物もあります。

  • 測定前に行った希釈を補正する必要がありますか。

    はい。測定前に試料へ加えた総希釈を入力すると、本ツールはそれを掛け合わせ、報告される濃度が希釈後の分取液ではなくオリジナルチューブのものであるようにします。例えば2 µLの試料を100 µLにすると希釈倍率は50です。この倍率を忘れるのがもうひとつの典型的なベンチミスで、適用した希釈ぶんだけ濃度を過小に報告します。

  • A260定量では分からない試料の特徴は何ですか。

    A260は260 nm付近に吸光する核酸を測るため、タンパク質・フェノール・遊離ヌクレオチドなどの夾雑物みかけの濃度を押し上げ、完全な物質と分解した物質を区別できません。また、光路長1 cm、または同等のマイクロ体積オプティクスでブランク補正済みの測定を前提とします。完全性はゲルやフラグメント分析で確認し、純度比は大まかなスクリーニングとして扱ってください。

研究および教育目的でのみご利用ください。臨床判断や診断には使用できません。重要な用途に使う前に、必ず計算結果を独立して確認してください。