Calculateur de master mix PCR
Saisissez les volumes par réaction de chaque composant du master mix, le nombre de réactions et la fraction d’excédent couvrant les pertes de pipetage. Le calculateur renvoie le volume total à préparer pour chaque composant — et le volume final du master mix — avec des avertissements pratiques lorsque la quantité de matrice ou d’amorce dépasse des seuils courants de paillasse.
Calculateur
Saisissez votre formule et calculez pour voir le mélange maître
Mélange maître total (hors matrice)
Note de paillasse
Per-component volumes
| Composant | µL / rxn | µL au total |
|---|
Inventory check (read-only)
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Vcomponent = Cfinal × Vrxn ÷ Cstock · Vpolymerase = U ÷ (U/µL) · Vwater = (Vrxn − Vtemplate) − ΣV
Le volume de chaque additif provient de l'équation de dilution C₁V₁ = C₂V₂. La polymérase étant spécifiée en quantité par réaction (U), son volume est simplement les unités souhaitées divisées par la concentration mère. L'eau complète le volume de réaction après la matrice et les additifs. Chaque volume est ensuite multiplié par (réactions × facteur d'excès) pour le mélange maître.
À propos de ce calcul
De quoi il s'agit
Un master mix PCR est une préparation unique contenant tous les réactifs communs à toutes les réactions (tampon, dNTP, polymérase, eau), aliquotée avant l’ajout des amorces spécifiques à la matrice. Préparer un master mix améliore la reproductibilité et fait gagner du temps de pipetage.
Pourquoi on l'utilise
Réaliser 24, 48 ou 96 réactions un réactif à la fois est lent et source d’erreurs. Un master mix rend chaque tube de réaction identique à l’exception de sa matrice, et l’excédent pour volume mort (généralement 5–10 %) évite que le dernier tube soit en sous-quantité.
L'intérêt de ce calculateur
Les volumes par réaction sont minuscules (µL) et les petits écarts se cumulent sur toute la plaque. Le calculateur multiplie chaque composant par N et par un facteur d’excédent, et affiche des avertissements courants de paillasse (pourcentage de matrice, concentration d’amorce) faciles à manquer dans une préparation chargée.
Hypothèses clés
- Chaque réaction utilise le même master mix (même polymérase, même paire d’amorces, même volume final).
- La fraction d’excédent est adaptée au nombre de réactions (un 10 % fixe fonctionne pour ≤50 réactions).
- Les stocks de composants sont aux concentrations attendues par le calculateur — vérifiez avant la mise à l’échelle.
Limites
- Il ne vérifie pas l’appariement des Tm des amorces ni la formation de dimères — à concevoir séparément.
- Il ne modélise pas l’optimisation de température d’un thermocycleur à gradient.
- Il n’ajuste pas pour les réactifs visqueux (par ex. stocks à forte concentration de glycérol) où la précision de pipetage baisse.
Ce que cet outil calcule
- Component volumes
- Volume of each additive per reaction and for the whole master mix.
- Nuclease-free water (total)
- Water volume to bring the master mix to the reaction volume.
- Volume total du mélange maître
- Combined volume of all additives and water, excluding template.
Questions fréquentes
Qu'est-ce qu'un master mix PCR et pourquoi en préparer un ?
Un master mix est une préparation unique contenant tous les composants de la réaction sauf la matrice d'ADN — tampon, dNTP, MgCl₂, polymérase, amorces et eau. Répartir une seule préparation en aliquotes, plutôt que de pipeter chaque réactif dans chaque tube, garde une composition de réaction identique entre les échantillons et réduit l'erreur et le temps de pipetage. Ce calculateur met à l'échelle une recette par réaction pour n'importe quel nombre de tubes et renvoie les µL de chaque composant par réaction et au total.
Comment utiliser le calculateur de master mix PCR ?
Saisissez le volume de réaction, le nombre de réactions, le facteur d'excédent et le volume de matrice par tube, puis définissez la concentration de stock et la concentration finale de chaque composant : tampon (×/×), dNTP (mM/mM), MgCl₂ (mM/mM), polymérase (stock en U/µL avec les U voulues par réaction) et les deux amorces (µM/µM). Le résultat affiche le volume de chaque additif par réaction et pour l'ensemble du master mix, l'eau sans nuclease comblant le reste. Saisissez 0 comme concentration finale d'un composant optionnel, comme du MgCl₂ supplémentaire ou une amorce, pour l'omettre du mix.
Qu'est-ce que le facteur d'excédent et pourquoi préparer un master mix en trop ?
Le pipetage perd un peu de chaque réactif, aussi les laboratoires préparent généralement 5 à 10 % de mix en excédent pour que le dernier tube ne soit pas en sous-quantité. Dans ce calculateur l'excédent est un multiplicateur appliqué à toute la recette : 1,1 prépare 10 % en plus, et les valeurs acceptées vont de 1 à 10. Chaque composant et l'équilibre en eau sont mis à l'échelle par nombre de réactions × excédent ; les totaux affichés sont donc les volumes à pipeter dans le tube commun.
Comment le calculateur calcule-t-il le volume de chaque composant ?
Chaque additif basé sur une concentration utilise l'équation de dilution V = concentration finale × volume de réaction ÷ concentration de stock, la même relation C1V1 employée au paillasse. La polymérase fait exception : vous saisissez une quantité en unités par réaction face à un stock en U/µL, son volume est donc unités ÷ concentration de stock. L'eau est équilibrée par soustraction — volume de réaction moins matrice moins tous les additifs.
Pourquoi la matrice d'ADN n'est-elle pas incluse dans le master mix ?
La matrice est le seul composant qui diffère entre les tubes, aussi elle est ajoutée à chaque tube séparément après la distribution du master mix. Vous saisissez quand même le volume de matrice par tube, car le calculateur la soustrait lors de l'équilibrage de l'eau pour que mix plus matrice égale votre volume de réaction. Si les additifs ne tiennent pas dans l'espace restant après la matrice, le calculateur signale une erreur et vous demande d'augmenter le volume de réaction ou de réduire les concentrations des composants.
À usage uniquement scientifique et pédagogique. Ne convient pas aux décisions cliniques ou diagnostiques. Vérifiez toujours vos calculs de manière indépendante avant toute utilisation critique.