Calculadora de Master Mix de PCR
Introduzca los volúmenes por reacción de cada componente de la master mix, el número de reacciones y la fracción de exceso para cubrir pérdidas de pipeteo. La calculadora devuelve el volumen total a preparar de cada componente — y el volumen final de la master mix — con avisos prácticos cuando su molde o cebadores cruzan umbrales conocidos en la bancada.
Calculadora
Introduzca su mezcla y calcule para ver la mezcla maestra
Mezcla maestra total (sin plantilla)
Nota de laboratorio
Per-component volumes
| Componente | µL / rxn | µL totales |
|---|
Inventory check (read-only)
Based on the Inventory page in this browser. BiomeBench only looks up stock here — it never consumes, reserves, or edits inventory.
Vcomponent = Cfinal × Vrxn ÷ Cstock · Vpolymerase = U ÷ (U/µL) · Vwater = (Vrxn − Vtemplate) − ΣV
El volumen de cada aditivo procede de la ecuación de dilución C₁V₁ = C₂V₂. La polimerasa se especifica como cantidad por reacción (U), así que su volumen es simplemente las unidades deseadas divididas entre la concentración madre. El agua completa el volumen de reacción tras plantilla y aditivos. Cada volumen se escala después por (reacciones × factor de exceso) para la mezcla maestra.
Acerca de este cálculo
Qué es
Una master mix de PCR es una preparación única que contiene todos los reactivos comunes a todas las reacciones (tampón, dNTPs, polimerasa, agua), alicuotada antes de añadir los cebadores específicos del molde. Preparar una master mix mejora la reproducibilidad y ahorra tiempo de pipeteo.
Por qué se usa
Correr 24, 48 o 96 reacciones un reactivo a la vez es lento y propenso a errores. Una master mix hace que cada tubo de reacción sea idéntico salvo por su molde, y el exceso por volumen muerto (típicamente 5–10 %) evita que el último tubo se quede corto.
Por qué existe esta calculadora
Los volúmenes por reacción son diminutos (µL) y los pequeños errores se acumulan en toda la placa. La calculadora multiplica cada componente por N y por un factor de exceso, y muestra avisos comunes en bancada (porcentaje de molde, concentración de cebadores) fáciles de pasar por alto en una preparación ajetreada.
Supuestos clave
- Cada reacción usa la misma master mix (misma polimerasa, mismo par de cebadores, mismo volumen final).
- La fracción de exceso es apropiada para el número de reacciones (un 10 % fijo funciona para ≤50 reacciones).
- Los stocks de componentes están a las concentraciones que la calculadora espera — verifique antes de escalar.
Limitaciones
- No verifica la coincidencia de Tm de cebadores ni la formación de dímeros — diséñelos por separado.
- No modela la optimización de temperatura de un ciclador de gradiente.
- No ajusta para reactivos viscosos (p. ej. stocks con alta concentración de glicerol) donde la precisión de pipeteo cae.
Qué calcula
- Component volumes
- Volume of each additive per reaction and for the whole master mix.
- Nuclease-free water (total)
- Water volume to bring the master mix to the reaction volume.
- Volumen total de mezcla maestra
- Combined volume of all additives and water, excluding template.
Preguntas frecuentes
¿Qué es una master mix de PCR y por qué preparar una?
Una master mix es una preparación única que contiene todos los componentes de la reacción excepto el molde de ADN: tampón, dNTPs, MgCl₂, polimerasa, cebadores y agua. Repartir una sola mezcla en alícuotas, en lugar de pipetear cada reactivo en cada tubo, mantiene idéntica la composición de todas las reacciones y reduce el error y el tiempo de pipeteo. Esta calculadora escala una fórmula por reacción al número de tubos que indiques y devuelve los µL de cada componente por reacción y en total.
¿Cómo se usa la calculadora de master mix de PCR?
Introduce el volumen de reacción, el número de reacciones, el factor de exceso y el volumen de molde por tubo, y define la concentración stock y final de cada componente: tampón (×/×), dNTPs (mM/mM), MgCl₂ (mM/mM), polimerasa (stock en U/µL con las U deseadas por reacción) y ambos cebadores (µM/µM). El resultado muestra el volumen de cada aditivo por reacción y para toda la master mix, y el agua libre de nucleasas completa el resto. Pon 0 como concentración final de un componente opcional, como el MgCl₂ extra o un cebador, para omitirlo de la mezcla.
¿Qué es el factor de exceso y por qué preparar master mix de más?
El pipeteo pierde un poco de cada reactivo, así que los laboratorios suelen preparar un 5–10 % de mezcla extra para que al último tubo no le falte nada. En esta calculadora el exceso es un multiplicador aplicado a toda la fórmula: 1.1 prepara un 10 % de más, y los valores aceptados van de 1 a 10. Cada componente y el balance de agua se escalan por número de reacciones × exceso, así que los totales del resultado son los volúmenes que debes pipetear al tubo común.
¿Cómo calcula la calculadora el volumen de cada componente?
Cada aditivo basado en concentración usa la ecuación de dilución V = concentración final × volumen de reacción ÷ concentración stock, la misma relación C1V1 que se usa en la bancada. La polimerasa es la excepción: introduces una cantidad en unidades por reacción frente a un stock en U/µL, así que su volumen es unidades ÷ concentración stock. El agua se calcula por diferencia: volumen de reacción menos molde menos todos los aditivos.
¿Por qué el molde de ADN no se incluye en la master mix?
El molde es el único componente que cambia entre tubos, por eso se añade a cada tubo por separado después de repartir la master mix. Aun así introduces el volumen de molde por tubo, porque la calculadora lo resta al equilibrar el agua para que mezcla más molde sumen tu volumen de reacción. Si los aditivos no caben en el espacio que deja el molde, la calculadora informa de un error y pide que aumentes el volumen de reacción o reduzcas las concentraciones de los componentes.
Solo para uso en investigación y docencia. No destinado a decisiones clínicas o de diagnóstico. Verifique siempre los cálculos de forma independiente antes de usarlos en aplicaciones críticas.