Conteggio e vitalità con emocitometro
Hai contato le cellule all’emocitometro? Inserisci i conteggi di cellule vitali e non vitali, il numero di quadrati grandi contati e il fattore di diluizione (ad esempio 2 per una miscela 1:1 con blu di trypan). Il calcolatore restituisce le concentrazioni totale e vitale, la percentuale di vitalità e — se fornisci il volume del campione — il totale di cellule nella sospensione. Il risultato alimenta direttamente il Calcolatore di semina cellulare.
Calcolatore
Inserisci i tuoi conteggi e calcola per vedere le concentrazioni
Cellule vitali per mL
Nota da banco
cells per mL = (cells counted ÷ squares counted) × dilution factor × 10,000
In una camera Neubauer migliorata standard ogni quadrato grande è 1 mm² e la camera è profonda 0,1 mm, quindi un quadrato contiene 0,1 µL — il milionesimo di un litro. Una cellula in un quadrato equivale dunque a 10 000 cellule per mL prima della diluizione. La vitalità è vitali ÷ totali × 100.
Informazioni su questo calcolo
Che cos'è
A hemocytometer is a thick glass slide with a precisely etched counting chamber. Each large 1 mm² square holds a known volume (0.1 mm³ = 0.1 µL for the standard Neubauer), so counting cells in a small set of squares and dividing by the counted volume gives the concentration. Trypan blue stains non-viable cells; counting them separately yields a viability percentage.
Perché si usa
Every cell-culture experiment starts with a known cell concentration and viability. Hemocytometer counts are the bench standard for that: cheap, fast, and accurate enough to drive routine plating decisions and sterility checks.
Perché esiste questo calcolatore
The arithmetic (sum × dilution × 10⁴ per mL) is a fixed power-of-ten transform that is easy to misremember and impossible to spot-check by eye. The calculator applies the factor, computes viability, and propagates the count through to a total cells number if you have a sample volume.
Ipotesi fondamentali
- The cells were uniformly suspended at the time of sampling.
- You counted the standard 1 mm² large squares (or know the equivalent volume for a different chamber).
- Trypan blue exclusion is a valid proxy for viability for your cell type.
Limiti
- It does not detect small cells or subcellular debris; consider a calibrated automated counter for those.
- It does not model clumping; if cells are clumped, an accurate count requires disaggregation first.
- Trypan blue exclusion overestimates viability in some contexts (e.g. some apoptotic cells still exclude dye).
Che cosa calcola
- Cellule vitali per mL cells/mL
- Concentration of live cells — the value to use for seeding.
- Cellule totali per mL cells/mL
- Viable plus non-viable concentration.
- Vitalità %
- Viable cells ÷ total cells × 100.
- Totale cellule contate
- Viable plus non-viable across all counted squares.
- Media di cellule per quadrato
- Total counted ÷ squares counted.
- Total cells in sample
- Only when a sample volume was supplied.
- Viable cells in sample
- Only when a sample volume was supplied.
Domande frequenti
Che cos’è una camera di Burker (emocitometro) e come il conteggio diventa concentrazione?
La camera di Burker — il nome comune italiano dell’emocitometro — è una camera di conteggio in vetro inciso con profondità nota: su ogni quadrato grande da 1 mm² di una camera Neubauer migliorata standard si trovano esattamente 0,1 µL di sospensione. Poiché quel volume è fisso, un conteggio manuale si converte direttamente in concentrazione — cellule per quadrato × fattore di diluizione × 10⁴ dà cellule per mL. Questo calcolatore applica quella conversione e restituisce cellule totali/mL, cellule vitali/mL e percentuale di vitalità dai conteggi inseriti.
Come si usa il calcolatore dell’emocitometro — cosa inserisco?
Inserisci le cellule vitali (chiare, non colorate) e non vitali (colorate dal blu di trypan) sommate sui quadrati contati, il numero di quadrati grandi e il fattore di diluizione — 2 per una miscela 1:1 con blu di trypan, oppure 1 se il campione non era diluito. Aggiungi facoltativamente il volume totale della sospensione e il calcolatore riporta anche il totale di cellule e di cellule vitali nell’intero campione. Accanto alle concentrazioni mostra il totale delle cellule contate e la media per quadrato.
Come si calcola la vitalità cellulare con il blu di trypan?
Le cellule vive escludono il colorante e restano chiare; quelle morte lo assorbono e si tingono di blu, e la vitalità è semplicemente vitali ÷ (vitali + non vitali) × 100. Il calcolatore la calcola dai tuoi due conteggi e avvisa quando la vitalità scende sotto il 70 % o quando sono state contate così poche cellule che il risultato non è statisticamente affidabile. Un conteggio totale zero dà una vitalità indefinita, che il calcolatore riporta come “non definita” invece di 0 %.
Quanti quadrati devo contare su una camera di Burker?
La convenzione tipica sono i quattro quadrati grandi da 1 mm² agli angoli, e indichi al calcolatore quanti ne hai contati davvero perché la media per quadrato sia coerente. Contare meno di 4 quadrati grandi fa scattare un avviso perché i conteggi piccoli portano un vero errore di campionamento. Contare più quadrati riduce l’errore del conteggio manuale, e mescolare bene la sospensione prima di caricare la camera conta altrettanto.
Cosa faccio con il risultato dopo aver contato le cellule?
Le cellule vitali per mL sono il numero che usa il tuo passaggio successivo. Dopo il calcolo, il risultato offre azioni che trasferiscono la concentrazione vitale nel Calcolatore di semina cellulare o nel Calcolatore di normalizzazione della piastra, dove arriva già compilata nel campo di concentrazione. Il flusso al banco è quindi: conta e verifica la vitalità, poi progetta i volumi di sospensione e terreno per contenitore, oppure diluisci la sospensione a una concentrazione di lavoro comune.
Solo per uso didattico e di ricerca. Non destinato a decisioni cliniche o diagnostiche. Verificare sempre i calcoli in modo indipendente prima di usi critici.